免疫熒光(Immunofluorescence,簡稱IF)是一種基于抗原-抗體特異性結合并結合熒光標記物進行檢測的技術。它主要用于檢測組織切片、細胞樣本或單個分子中特定抗原的存在和定位。通過熒光顯微鏡觀察,免疫熒光能夠展示抗原的分布及其在細胞或組織中的表達情況,是研究蛋白質表達、細胞標志物以及分子間相互作用的重要工具。 酪酰胺信號放大(TSA,Tyramide signal amplification)技術是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法,能夠實現信號放大,同源抗體單標、雙標、三標、四標、五標等多重功能。熒光標記的酪胺分子在H2O2環(huán)境下被二抗標記的HRP催化激活,產生大量的酶促反應產物,使熒光素在抗原-抗體結合部位與組織周圍的蛋白殘基共價結合,形成大量的熒光素信號,并實現信號放大。運用熱處理或微波處理洗脫一抗和二抗并同時能保留與組織抗原共價結合的熒光素。因此可以通過使用不同的偶聯(lián)染料多次循環(huán)實驗對多種蛋白抗原的熒光標記,實現一張組織切片上多個蛋白的共染色。