疾病模型＆免疫缺陷鼠
SCID Beige
該品系為 Prkdcscid 和 Lystbg 常染色體隱性突變同類系 (congenic) 小鼠，由 Croy 等在 Guelph 大學(xué)通過(guò) C.B-17-Prkdcscid 和 C57BL/6-Lystbg 小鼠的雜交得到。該品系 B、T 淋巴細(xì)胞功能缺失，同時(shí)自然殺傷細(xì)胞 (NK細(xì)胞) 功能低下，SCID Beige 小鼠主要臟器重量除脾臟和胰腺減重外，其它內(nèi)臟連續(xù)增加，年齡都會(huì)影響總膽固醇和高密度載脂膽固醇濃度。
特征
該突變基因小鼠血清中缺乏免疫球蛋白，其細(xì)胞在活體外對(duì)測(cè)試 B 或 T 細(xì)胞功能的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)不發(fā)生反應(yīng)，在組織病理反面表現(xiàn)為淋巴組織重度淋巴細(xì)胞減少。
用途
1.應(yīng)用于人類生理學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)和血液病學(xué)等方面的研究。
2.能接受人體正常組織的移植而成為一種嵌合體小鼠（即SCID-hu模型）進(jìn)行人體免疫功能重建和腫瘤學(xué)方面的研究。
生理生化數(shù)據(jù)
基因鑒定報(bào)告：
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樣本信息和目的：
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樣本：SCID Beige小鼠
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目的：確認(rèn)SCID Beige小鼠基因修飾類型
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靶基因：Prkdc Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide
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NCBI號(hào)：19090
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NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/19090
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靶基因2：Lyst lysosomal trafficking regulator
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Gene ID：17101
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NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/17101
方法和結(jié)果
PRKDC（Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide，DNA 依賴性蛋白激酶，又名 scid）能識(shí)別和傳遞DNA 斷裂損傷信號(hào)，當(dāng)細(xì)胞 DNA 發(fā)生斷裂損傷后，PRKDC 復(fù)合物就聚合在損傷位點(diǎn)上，隨之蛋白激酶被活化，募集并磷酸化其下游的 DNA 修復(fù)蛋白啟動(dòng)DNA斷裂修復(fù)。此外，PRKDC 在維持端粒穩(wěn)定性，免疫蛋白質(zhì)的位置特異性重組中也發(fā)揮重要的作用。Prkdc 基因位于小鼠 16 號(hào)染色體上，有 87 個(gè)外顯子。
由之前的 NOD-SCID 小鼠鑒定報(bào)告（SPF2020102001ZJY）發(fā)現(xiàn)：SCID 系列小鼠的基因突變類型為 Prkdc 基因85號(hào)外顯子發(fā)生單核苷酸改變（T突變?yōu)?/span>A）后，提前引入終止密碼子，導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止。堿基突變后PRKDC蛋白預(yù)測(cè)將截短83個(gè)氨基酸。我們使用該報(bào)告（SPF2020102001ZJY）中的鑒定引物（Prkdc-ex85-F：5'-TATGTGGACTTCTTCTCACC-3' Prkdc-ex85-R: 5'-GGTAAAGCCGCCCTAAGAGT-3'，產(chǎn)物長(zhǎng)度：454 bp ）、以 6 個(gè) SCID Beige（BG）小鼠的鼠尾基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果如下：
每?jī)蓚€(gè) PCR 產(chǎn)物混合并進(jìn)行 Sanger 測(cè)序結(jié)果，結(jié)果顯示（圖 3 ）：6 只 BG 小鼠的均為 Prkdc 基因 85 號(hào)外顯 子單核苷酸改變（T 突變?yōu)?nbsp;A），即為 SCID 基因突變。
Lyst（lysosomal trafficking regulator，溶酶體轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子；又名 Beige）是一種蛋白質(zhì)編碼基因，并可能參與色素沉著。Lyst 基因突變可能與 Chediak-Higashi綜合征（CHS）相關(guān)。Lyst 基因位于 13 號(hào)染色體上，有 55 個(gè)外顯子（圖 4）。
但 Lyst 基因轉(zhuǎn)錄本201（http://asia.ensembl.org/Mus_musculus/Tran/Exons?db=core; g=ENSMUSG00000019726; r=13:13590397-13778803;t=ENSMUST00000110559）僅顯示 53 個(gè)外顯子（圖 5）。文獻(xiàn)報(bào)道顯示，BG 小鼠的 Lyst 基因突變是“外顯子 54 中 3bp 缺失的結(jié)果，導(dǎo)致該蛋白羧基末端附近的 3741 位密碼子處異亮氨酸缺失”，在轉(zhuǎn)錄本 201 中比對(duì)顯示基因突變位置位于 Lyst 基因外顯子 52 上。針對(duì)Lyst基因外顯子52 和53 設(shè)計(jì)引物：bg-Ex52-F:5’-TGCAGTAGGTTATCCTGGCA-3’,bg-Ex52-R:5’-GAAGCCTTCACACCTGCATTC-3’（擴(kuò)增長(zhǎng)度303bp）; bg-ex53-1F:5’-CAGTCTGCTGGCCGTCTTTT-3’,bg-ex53-1R:5’-TGGGTGTGCTGAGTATAGGG-3’（擴(kuò)增長(zhǎng)度 631bp），并進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增和測(cè)序（圖6）。比對(duì)結(jié)果顯示，Lyst 基因外顯子52 有 3bp 缺失（CAT），導(dǎo)致該蛋白 3740 位和 3741 位密碼子處兩個(gè)異亮氨酸突變?yōu)?nbsp;1 個(gè)異亮氨酸（圖7-8）；外顯子 53 無(wú)突變（結(jié)果未顯示）。
結(jié)論
斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司 SCID Beige 小鼠的基因編輯類型為：Lyst 基因外顯子 52 有 3bp 缺失（CAT），導(dǎo)致該蛋白 3740 位和 3741 位密碼子處兩個(gè)異亮氨酸突變?yōu)?nbsp;1 個(gè)異亮氨酸；Prkdc 基因 85 號(hào)外顯子單核苷酸改變（T 突變?yōu)?nbsp;A）。
