疾病模型＆免疫缺陷鼠
ApoE小鼠
ApoE 基因敲除小鼠是通過同源重組技術制備的具有 3 號外顯子純合缺失的小鼠模型。2017 年斯貝福（北 京）生物技術有限公司從國家嚙齒類實驗動物種子中心引入培育。
特征
1.ApoE 小鼠模型表現(xiàn)出異常高血脂癥狀，在 3 月齡時即出現(xiàn)動脈脂肪堆積，17 月齡時小鼠腦內(nèi)將出現(xiàn)脂瘤性纖維瘤。
2.學習記憶能力出現(xiàn)障礙，其與 CHD、高脂血癥、腦梗塞、AD 及慢性乙型肝炎等疾病相關。
用途
用于研究 ApoE 基因相關疾病，如糖尿病與肥胖研究，心血管研究，動脈粥樣硬化研究以及新陳代謝研究。
成長曲線
生理生化數(shù)據(jù)
樣本信息和目的
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樣本：ApoE小鼠
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目的：確認ApoE小鼠基因修飾類型
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靶基因：ApoE apolipoprotein E（apoE）
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NCBI號：11816
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NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/11816
方法和結果
ApoE（apolipoprotein E）是載脂蛋白 E，一種脂肪結合蛋白（載脂蛋白），乳糜微粒和中密度脂蛋白（IDLs）的一部分。ApoE 主要負責運輸脂蛋白、脂溶性維生素及膽固醇。ApoE 基因位于 Chr7 上，共有 7 個外顯子。
查詢目前所有 ApoE 敲除品系的設計方案和基因型鑒定方案，結果顯示目前的方案主要有兩種：胚胎干細胞技術和 CRISPR/Cas9 方案，針對兩種方案分別設計擴增和測序引物，具體方案如表1：
ApoE 純合子靶基因 PCR 擴增及瓊脂糖凝膠電泳結果如圖 2，結果顯示，該動物為 ES 干細胞法制作的 ApoE 突變小鼠。
注：1、2為方案1擴增結果，3、4為方案2擴增結果，5、6為方案3擴增結果。1、3、5泳道基因組模板為ApoE小鼠，2、4、6泳道為空白對照組，模板為水。
ApoE 突變小鼠是 Nobuyo Maeda 博士在 The University of North Carolina 開發(fā)的，他們使用胚胎干細胞技術產(chǎn)生 ApoE 基因突變的小鼠品系，質(zhì)粒載體設計方案如圖 3：
使用oIMR0180和oIMR0182 引物對靶基因進行擴增，并進行雙向 Sanger 測序。與 NCBI 報道的 ApoE 基因外顯子序（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_009696.4）比對，結果顯示：oIMR0180 引物正向測序比對失?。ńY果未顯示），oIMR0182 反向測序，ApoE 基因 3 號外顯子部分序列可以擬合。ApoE 基因外顯子序列上 289 號堿基開始3號外顯子剩余序列被Neo基因（新霉素抗性基因 ）所取代（如圖 4）。ApoE 基因其他外顯子擴增測序結果未顯示突變。
結論
斯貝福（北京）生物技術有限公司 ApoE 小鼠的基因編輯類型為：ApoE 基因3號外顯子部分堿基（125bp）和部分內(nèi)含子被 Neo 基因取代，其他外顯子無突變。
